說說大鼠心肌細胞H9C2處理和傳代方法

　　大鼠心肌細胞H9C2是原始克隆細胞系的亞克隆，由Kimes和Brandt組成，從胚胎bd1x大鼠心臟組織中獲得，表現(xiàn)出骨骼肌的許多特征。該細胞系中的成肌細胞可以融合形成多核肌管并對乙酰膽堿刺激作出反應(yīng)。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%，融合就會迅速發(fā)生。

　　

　　大鼠心肌細胞H9C2處理：

　　

　　1、細胞復(fù)蘇：將裝有1ml細胞懸液的冷凍管于37℃水浴中搖勻解凍，加入4ml培養(yǎng)基混勻。1000轉(zhuǎn)離心4分鐘，棄上清，加入1-2ml培養(yǎng)基，吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px培養(yǎng)皿中，加入約8ml培養(yǎng)基培養(yǎng)過夜）。第二天，換液并檢查細胞密度。

　　

　　2、細胞傳代：如果細胞密度達到80%-90%，就可以進行傳代培養(yǎng)。

　　

　　大鼠心肌細胞H9C2傳代方法：

　　

　　1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣鎂離子的PBS洗滌細胞1-2次。

　　

　　2、在培養(yǎng)瓶中加入2ml消化液（0.25%trypsin-0.53mmedta），放入37℃培養(yǎng)箱消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況。如果大部分細胞變圓脫落，迅速收回控制臺，輕敲培養(yǎng)瓶數(shù)次，加入少量培養(yǎng)基終止消化。

　　

　　3、按6-8ml/瓶加入培養(yǎng)基，輕輕打勻，吸出，1000rpm離心4分鐘，棄上清，加入1-2ml培養(yǎng)基吹勻。

　　

　　4、接受細胞后的一次傳代，建議將細胞懸液按1:2的比例分裝到裝有6ml培養(yǎng)基的新培養(yǎng)皿或瓶子中。建議冷凍1個備用，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2至1:5的比例進行。

　　

　　5、細胞冷凍保存：當細胞生長良好時，可以冷凍保存。