大鼠心肌細胞H9C2該怎么進行細胞處理？

　　大鼠心肌細胞H9C2是源自胚胎大鼠心臟的大鼠心肌細胞，具有許多骨骼肌特征。該細胞系中的成肌細胞可以融合形成多核肌管，并對乙酰膽堿刺激作出反應。如果培養基中的血清濃度降低到1％，融合會很快發生。那么細胞該怎么處理呢？
 

　　1、復蘇細胞：將裝有1ml細胞懸液的冷凍保存管放入37℃水浴中（水面應低于冷凍保存管的蓋部分）并搖勻并融化，然后將其轉移到裝有4ml培養基的15ml離心管中。并混合均勻。以1000rpm離心4分鐘，棄去上清液，加入1ml培養基并充分吹掃。然后將所有細胞懸浮液轉移至含有5ml培養基的培養瓶中過夜培養。第二天，更換液體并檢查細胞密度。

　　2、細胞傳代：如果大鼠心肌細胞H9C2的密度達到80％-90％，則可以進行傳代培養。

　?。?）丟棄培養上清液，并用不含鈣或鎂離子的PBS潤濕細胞1-2次。

　?。?）在培養瓶中加入2ml消化液（0.25％胰蛋白酶-0.53m培養基），在37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞的消化情況。如果大多數細胞變圓形并脫落，請迅速將其帶回手術臺，輕按培養瓶幾次，然后加入3ml培養基終止消化。

　?。?）輕輕吹動后，將其吸出，移入15ml離心管中，以1000rpm離心4分鐘，棄去上清液，加入1ml培養基，并均勻吹掃。

　　（4）轉移到制備的含有5ml培養基的t-25燒瓶或含有14ml培養基的t-75燒瓶中。

　　3、細胞凍存：大鼠心肌細胞H9C2生長良好時可以冷凍保存。凍結貼壁細胞后，應將其消化并計數。根據細胞傳代方法的1-3步進行消化，并使用血清進行懸浮。直接計數懸浮細胞，離心，重懸血清，并加入DMSO至終濃度10％。加入DMSO后，應迅速混合，并按照每1毫升的量將其分配到冷凍儲存管中。