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      技術(shù)文章

      小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養(yǎng)方法

      更新更新時間:2019-12-27 瀏覽次數(shù):2238

      平滑肌即無紋肌的通稱,平滑肌是由長紡錘形的單核細胞構(gòu)成。它不構(gòu)成獨立的器官,而只是成為構(gòu)成體壁和內(nèi)臟壁的因素(肌層)。平滑肌細胞互相連接,形成管狀結(jié)構(gòu)或中空器官;在功能上可以通過縮短和產(chǎn)生張力使器官發(fā)生運動和變形,也可產(chǎn)生連續(xù)收縮或緊張性收縮,使器官對抗所加負荷而保持原有的形狀。

      小鼠支氣管平滑肌細胞的收縮、舒張、增殖和凋亡與臨床許多疾病的病理生理過程有關(guān).如支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘發(fā)病時,可以檢測到氣管平滑肌發(fā)生數(shù)目的增生和肥大,表型也發(fā)生改變,由收縮型轉(zhuǎn)為合成型與分泌型,并分泌多種與細胞因子;而且出現(xiàn)向氣管腔遷移的跡象。

       

      小鼠支氣管平滑肌細胞來源于實驗動物正常支氣管組織長梭狀細胞,貼壁培養(yǎng)。通過平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫熒光染色鑒定為陽性鑒定純度高于90%不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

      1.試驗所需儀器設(shè)備及試劑

      (1)儀器

      儀器名稱

      規(guī)格型號

      廠家

      生物安全柜

      BSC-1500ⅡA2-X

      濟南鑫貝西生物技術(shù)有限公司

      CO2細胞培養(yǎng)箱

      BC-J160S

      上海博迅實業(yè)有限公司

      熒光倒置顯微鏡

      DS-Ri2

      Nikon

      高速冷凍離心機

      Multifuge X1R

      Thermo Fisher

      電熱恒溫鼓風干燥箱

      DHG-9123A

      上海精宏實驗設(shè)備有限公司

      (2)試劑耗材

      試劑名稱

      規(guī)格/貨號

      廠家

      T25細胞培養(yǎng)瓶

      430639

      Coming

      血球計數(shù)板

      Neubauer improved

      Marienfeld

      細胞培養(yǎng)孔板

      WHB-24

      上海臥宏生物科技有限公司

      平滑肌細胞*培養(yǎng)基

      PriMed-iCell-004

      鏡像綺點(上海)細胞技術(shù)有限公司

      0.25%胰蛋白酶(含0.02%EDTA)

      1734858

      Gibico

       

      2.小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養(yǎng)

      1) 取4-5周齡的小鼠,斷頸處死后,泡于75%的酒精中,

      2) 剖開胸腔,取出完整氣管及肺組織,放入無菌PBS中,

      3) 在體視顯微鏡下,小心分離出下游支氣管,

      4) 用眼科剪及鑷子分離肌層并剪碎,

      5) 加入0.1% I + II + IV + dispase,4℃過夜消化,

      6) 第二天置于37℃水浴搖床中消化2~3h,

      7) 待液體變渾濁后加入*培養(yǎng)基終止消化,充分吹打,

      8) 過100目篩網(wǎng),收集濾液,1000rpm離心5min,棄去上清,

      9) 用*培養(yǎng)基重懸沉淀,鋪瓶。

      除了上述的細胞分離方法以外,鏡像綺點還有很多關(guān)于其他細胞的分離方法,想要學習的小伙伴可以來鏡像綺點進行現(xiàn)場學習,如果想要其他原代分離培養(yǎng)方法,可在購買相應的細胞過程中,贈送該細胞的分離方法及培養(yǎng)條件,想要了解更多,打電話或咨詢相關(guān)工作人員。

      鏡像綺點(上海)細胞技術(shù)有限公司地址:上海市奉賢區(qū)茂園路260號臨港南橋科技城56號樓7層 郵箱:3982882774@qq.com

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